“博生癌宁”提取液
高浓度组(A组):抗癌有效成分(DB活性因子)含量(480μg/ml)
低浓度组(B组):抗癌有效成分(DB活性因子)含量(320μg/ml)
2.肿瘤细胞:
实验所用人肿瘤细胞系5株:
(1)高分化鼻咽癌细胞系(CNE-1)
(2)低分化肺腺癌细胞系(GLC-82)
(3)宫颈鳞癌细胞系(宫-743)
(4)胃低分化腺癌细胞系(BGC-823)
(5)结肠癌细胞系(HCT-V2000)
实验前分别取各细胞株复苏,用含15%灭活小牛血清和青霉素、链霉素的RPMI1640培养液培养,待癌细胞呈对数生长时即可开始实验。
3.实验方法:
药物抑制肿瘤细胞生长的测定: 采用Rubinstein 的微量板改良染色法,分别取呈对数生长的5种人癌细胞,。用培养液稀释至5×104/ml,加入96孔培养板,每孔0.2ml(含1×104细胞/孔),37ºC、5%CO2孵育2h使细胞贴壁,加入药物”博生癌宁”提取液,每种浓度组设3个重复孔,每种癌细胞均设空白对照孔和阳性对照孔(5-Fu20μg/ml)。加药后癌细胞于370C、5%CO2培养,定时观察癌细胞的形态变化,48h后弃去培养液,每孔加入0.1ml0.5%的结晶紫溶液染色5分钟,弃去染液并用温PBS洗三次,吸干残液后,每孔加入0.1ml醋酸酒精(1% glacial acetic acid in 50% alcohol),置振荡器振荡5分钟后,即用酶标仪测定各孔570nm波长的OD值,然后计算癌细胞生长抑制率。并用SPSS统计软件包的概率单位法(Probit)计算癌细胞半数抑制浓度(IC50)。
4.实验结果:
“博生癌宁” 对肿瘤细胞生长抑制率测定结果显示,5株肿瘤细胞系均有不同程度的抑制作用,肿瘤细胞抑制率随药物浓度的上升而增高,呈明显的量效关系。抑制效应最好的是CNE-1和BGC-823细胞系,药物浓度为320μg/ml和480μg/ml时,抑制率均分别高达80%和93%以上,明显高于5-Fu(20μg/ml)的抑制率。


